Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

ПЦР, полимеразная цепная реакция, представляет собой метод ферментативной амплификации, позволяющий получить большое количество идентичных копий фрагмента ДНК. Таким образом, это позволяет получить несколько сотен микрограммов ДНК из менее чем одной пиктограммы гена, то есть амплификации порядка миллиарда.

ПЦР разбивается на три этапа:

• денатурация: две нити ДНК разделяются нагреванием (95 °C),
• гибридизация: при понижении температуры (50-70 ° C) праймеры, состоящие из коротких фрагментов ДНК, гибридизуются на нитях ДНК,
• удлинение: фермент полимеразы, Taq-полимераза, завершает синтез цепи ДНК из праймера благодаря олигонуклеотидам, присутствующим в реакционной среде.

Термоциклер, или Амплификатор, позволяет автоматизировать реакцию ПЦР, программируя последовательные циклы повышения и снижения температуры.

Применение ПЦР

ПЦР особенно полезна, когда генетический материал доступен в небольших количествах или находится в плохом состоянии. Она имеет множество применений в:

• генетическое клонирование и секвенирование
• диагностика генетических заболеваний
• обнаружение мутаций
• дозировка белка
• обнаружение ГМО
• идентификация лиц (судебная медицина)
• определение отцовства
• направленный мутагенез (с помощью мутированных праймеров)
• маркировка ДНК (особенно для фундаментальных исследований)
• изучение окаменелостей.