Вестерн-блот: что это такое?

Вестерн-блот, или белковый иммуноблот, — это популярный метод, используемый для обнаружения и количественного определения белков. Этот метод позволяет выделить и идентифицировать конкретный интересующий белок из сложной смеси белков, например, клеточного лизата. Применяемый в диагностике, биотехнологии, молекулярной биологии, протеомике и других областях, метод Вестерн-блот широко используется для оценки уровня экспрессии белка в клетках, а также изменений в размере и других свойствах.

Техника состоит из нескольких этапов:

• образцы белков наносятся на гель для электрофореза и разделяются в соответствии с их молекулярным весом. Для этого на гель подается электрический ток. Чем крупнее белки, тем менее быстро они мигрируют;
• после того как белки мигрировали, их переносят на мембрану, которая может быть изготовлена из нитроцеллюлозы или поливинилиденфторида (ПВДФ). Прикрепление белков к мембране происходит благодаря гидрофобным и ионным взаимодействиям между мембраной и белками;
• блокирование мембраны: этот шаг необходим для ограничения последующих неспецифических взаимодействий между антителами и мембраной. Блокирование проводится в концентрированном белковом растворе;
• обнаружение: принцип заключается в нанесении на мембрану меченых антител, которые специфичны для наблюдаемых белков. Затем можно наблюдать их положение на геле.Вестерн-блоты широко используются в исследовательских лабораториях, интересующихся ролью белков. В медицине они используются для диагностики некоторых заболеваний. Подтверждающие тесты на ВИЧ используют эту технологию для обнаружения антител к ВИЧ в образце сыворотки крови.